Les souches reçues du fournisseur sur milieu solide peuvent être
repiquées sur de nouvelles boîtes de milieu solide, pour conservation,
ou sur milieu liquide pour expérimentation.
Les repiquages et mises en culture doivent être faits en conditions
stériles. Les techniques sont identiques à celles utilisées
pour S. cervisiae.
La composition des milieux est indiquée
ci-dessous.
Boîte de culture de S. pombe
Observation
Des observations microscopiques classiques peuvent être réalisées
à partir d’une colonie prélevée sur boîte et
mise en suspension dans l’eau ou dans un colorant.
De nombreux colorants peuvent être employés : bleu de
méthylène, orcéine acétique, bleu de Nil… selon
les mêmes techniques que celles utilisées pour Saccharomyces
cerevisiae.
Il suffit en général de mélanger une goutte de
suspension avec une goutte de colorant et de recouvrir d’une lamelle. Toutefois,
l’observation de la morphologie cellulaire, l’identification des différentes
étapes du cycle et la mesure éventuelle de la taille des
cellules peuvent être menées simplement sans aucune coloration
sur une goutte de culture liquide.
Comme pour S. cerevisiae, la croissance d’une population peut
être suivie en milieu liquide par colorimétrie ou par numération
sur lame.
Cellules de S. pombe dans une
chambre de lame à numération (x 100)
Frottis non coloré (x 600)
Coloration par le bleu de méthylène (x 600)
Coloration par le bleu de méthylène (x 1000, objectif à immersion et zoom numérique)
Milieux de culture YE
Le milieu YE assure la croissance végétative et inhibe
conjugaison et sporulation.
Pour les souches auxotrophes, le milieu doit être supplémenté.
Liquide
Extrait de levure : 5 g
Glucose : 30 g
Eau distillée : 1 L
Solide
Ajouter 20 g de bacto-agar au milieu précédent.
Pour les souches auxotrophes, les suppléments, bases (adénine,
uracile) et/ou acides aminés (histidine, leucine, lysine), sont
ajoutés au milieu minimum à raison de 225 mg/L.
