• Introduction

• La drosophile (Drosophila melanogaster)

La drosophile est un insecte à métamorphoses complètes (holométabole) dont le cycle vital comporte plusieurs stades larvaires mobiles séparés par des mues, un stade nymphal immobile, la pupe, qui conduit au stade imaginal, l'état adulte, à la suite d'une métamorphose.
Les glandes salivaires de la larve de drosophile sont formées d’un petit nombre de cellules contenant des chromosomes géants. Bien que la larve asticot de la drosophile mesure seulement quelque 3 à 4 mm au dernier stade, l’observation des chromosomes géants au microscope ne présente aucune difficulté technique et est aisément réalisable avec du matériel courant de laboratoire pourvu que l’on dispose d’une loupe binoculaire et d'un microscope. L’élevage de drosophiles étant une pratique courante dans les laboratoires de SVT des établissements d’enseignement, en particulier pour réaliser des croisements et pour observer des mutants, il est facile de se procurer des larves au dernier stade avant la pupaison. On peut aussi commander des drosophiles chez un fournisseur, s'en procurer auprès d'un laboratoire universitaire ou en capturer au printemps ou en été en plaçant un coton imprégné de quelques gouttes de vin ou de vinaigre au fond d'une bouteille fermée par un petit entonnoir introduit dans le goulot.
 

	Drosophile mâle vue latéralement (longueur : 3-4 mm)
Drosophile vue dorsalement

• La larve

Larve asticot de drosophile au dernier stade (longueur : 3-4 mm)	Interprétation

Lorsque la larve entre en pupaison, il n'est plus possible de prélever les glandes salivaires. La pupe est immobile et ne se nourrit pas, contrairement à la larve. Elle mesure environ 3 mm. La métamorphose, déconstruction de la larve et reconstruction de l'adulte, se produit au sein de la pupe dont sort l'imago, insecte adulte. Pupe Noter la segmentation de la cuticule et les appendices

Imago à l'éclosion Noter les ailes non encore déployées

Les glandes salivaires qui débouchent dans le tube digestif en arrière de la bouche sont situées à la partie ventrale du corps. Pour les prélever, il faut séparer le corps de l’asticot en deux parties inégales entre les deuxième et troisième segments du corps : lorsque la tête est arrachée, elle entraîne avec elle l’extrémité antérieure du tube digestif rattachée aux glandes salivaires paires.
Pour cela, il est nécessaire d’utiliser une loupe binoculaire. La larve est placée sur une lame porte objet et la pointe d’une pince fine ou une aiguille est utilisée pour l’immobiliser tandis qu’une seconde pointe sert à arracher la tête. Une fois isolées, les glandes salivaires sont colorées avec un colorant électif de l'ADN permettant d'observer les chromosomes.
 

• Immobiliser la larve au niveau du troisième segment avec une des pointes tenue dans une main.
• Piquer au niveau de la tête avec la pointe tenue dans l'autre main.
• Faire glisser cette pointe vers l'extérieur pour écarter puis arracher la tête.
• Eliminer de la lame les restes de la partie postérieure du corps.
• Il reste alors sur la lame l'extrémité antérieure du tube digestif, transparente, reconnaissable à la chitine des pièces buccales, seul élément pigmenté en noir. Les glandes salivaires ont la forme de deux très petites masses arrondies reliées au tube digestif par un mince canal.

Recouvrir l'échantillon d'une goutte de colorant et laisser agir 5 à 10 minutes.	Echantillon recouvert d'une goutte d'orcéine acétique
Recouvrir d'une lamelle. Appuyer légèrement sur la lamelle avec une pince tenue à l'envers pour étaler au mieux les tissus.	Etalement

Repérer au faible grossissement du microscope l'échantillon sur la lame. Le parcourir au grossissement moyen pour identifier les cellules des glandes salivaires, très grandes et donc bien visibles. Sur le cliché ci-contre, noter les cellules déchirées par l'étalement. Observer au fort grossissement et si possible avec un objectif à immersion pour distinguer les détails des chromosomes colorés par l'orcéine, colorant électif de l'ADN. NB Le bleu de toluidine et le vert de méthyle donnent également de bons résultats. Pour tous les clichés présentés : Préparations extemporanées. Coloration par l'orcéine acétique.  Photographies numériques.

Cellules de glande salivaire (x 100)

Une cellule intacte (x 400) Noter l'alternance de bandes sombres et claires sur les chromosomes.

Zoom numérique x 4 sur le noyau (x 400) Les bandes apparaissent distinctement

Un autre noyau vu avec une mise au point différente (x 400)

Avec l'objectif à immersion, la succession de différents plans optiques en jouant sur la vis micrométrique permet de suivre les chromosomes enchevêtrés.
 

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