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ÉLECTROPHORÈSE D'ADN SUR GEL D'AGAROSE :
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Une méthode de coloration plus performante que celle au bleu de méthylène


16/11/1998

La pratique de l'électrophorèse sur gel d'agarose de fragments de restriction d'ADN est réalisable au lycée en raison notamment de la disponibilité d'une méthode de coloration des gels alternative à celle par le bromure d'éthidium, produit dangereux et qui nécessite de surcroît une rampe à UV. Cette méthode alternative utilise le bleu de méthylène et donne de bons résultats mais la durée de décoloration du fond est longue et le gel conserve une couleur de fond assez soutenue qui gêne parfois la visualisation des bandes.

Pour pallier ces inconvénients, un autre colorant peut être employé. Il s'agit de l'Azure A en solution alcoolique. Celui-ci colore l'ADN en quelques minutes et la décoloration du gel est également très rapide. En outre, le gel reste clair après cette opération et les bandes, même très pâles, peuvent être identifiées aisément.


Voir comparaison des deux types de coloration


Informations techniques
  • Colorant : solution alcoolique d'Azure A
    • Azure A : 0.04 g
    • Éthanol à 20 % : 100 mL
    L'Azur A est disponible chez SIGMA (référence A 6270, 1 g : 62.00 FF HT)
     
  • Coloration et décoloration
    1. Recouvrir la surface du gel avec le colorant.
    2. Laisser agir exactement 4 minutes puis vider le colorant (qui reste réutilisable).
    3. Éliminer l'excès de colorant de la surface avec quelques mL d'alcool à 70 % ou d'alcool à brûler pendant quelques secondes.
    4. Éliminer l'alcool puis rincer à l'eau du robinet.
    5. Rincer plusieurs fois pour éliminer totalement le colorant.
    On voit apparaître les bandes en quelques minutes mais l'intensité maximale de coloration est atteinte au bout de quelques heures. Laisser le gel dans une boîte étanche avec quelques gouttes d'eau pour éviter la dessication.
Voir une image grand format d'un gel

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