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Mise en évidence du chimiotropisme chez l'archéobactérie halophile Halobacterium salinarum
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Autres activités et protocoles avec H. salinarum :
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Introduction
Halobacterium dispose de plusieurs systèmes de transduction lui permettant de détecter la présence dans le milieux de diverses
substances chimiques. Couplés au "moteur" flagellaire, ces
transducteurs entraînent l'attraction de la cellule ou au
contraire son éloignement, selon la nature et la concentration
des substances présentes. Des systèmes comparables
existent pour différentes longueurs d'onde de la lumière.
Halobacterium est particulièrement attiré
par quelques acides aminés, leucine, isoleucine, valine,
méthionine, cystéine et arginine. C'est avec l'arginine,
acide aminé qui sert de substrat à la fermentation chez Halobacterium
que l'effet est le plus marqué. Différents di et
tripeptides comportant un ou plusieurs des acides aminés
précédents ont aussi un effet attractant. En revanche,
aucun sucre n'a cet effet et les benzoates et phénolates ont un
effet répulsif.
On peut tester l'effet de différentes substances chimiques en suivant le principe du protocole ci-dessous.
Protocole
Réaliser une culture en milieu liquide
complet et la laisser se développer pendant quelques jours
jusqu'à ce que le milieu soit suffisamment trouble,
correspondant à un grand nombre de cellules.
Préparer à part du milieu de culture liquide et y mélanger 0,25 % d'agarose.
Faire chauffer jusqu'à dissolution de l'agarose puis laisser refroidir.
Couler le milieu contenant l'agar dans une boîte de Pétri sur environ 5 mm d'épaisseur.
Prélever 1 à 2 mL de la culture dense et les verser dans la boîte de Pétri.
Mélanger avec un agitateur en verre pour disperser les cellules dans l'ensemble de la boîte.
Placer un cube de la substance à tester dans la boîte. La
substance ne doit pas se dissoudre dans le milieu, sinon elle finira
par diffuser partout. Dans l'exemple ci-dessous, c'est du bouillon en
cube lyophylisé qui a été testé. Ce type de
produit alimentaire fabriqué à partir d'extrait de viande
contient de nombreux acides aminés et peptides.
Pour tester un acide aminé, le dissoudre à une concentration minimale de 50 mmol.L-1
dans une solution d'agarose à 2 %. Chauffer pour faire fondre
l'agarose puis couler dans un moule quelconque, comme les barquettes en
plastique pour petits gâteaux. Laisser prendre au
réfrigérateur puis découper des cubes d'agarose
d'environ 1 cm de côté. Placer un cube dans la boîte
de Pétri.
Recouvrir la boîte de papier d'aluminium pour éviter
l'effet éventuel de la lumière et abandonner la
boîte pendant quelques jours.
Résultats
Après plusieurs
jours de culture à l'obscurité, le cliché montre
que les bactéries se sont regroupées autour du cube de
bouillon, comme le montre la densité élevée de
cellules visible à l'oeil nu autour du cube.
Elles ont vraisemblablement été attirées par les
acides aminés et les peptides qui diffusent lentement à
partir du cube et ont nagé vers le cube à l'aide de leurs
flagelles. Le sens de rotation de ces derniers est conditionné
par une cascade de signalisation intracellulaire qui dépend de
l'interaction entre les substances chimiques détectées et
des récepteurs membranaires et cytoplasmiques auxquels elles se
lient.
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