RETOUR AU SOMMAIRE
 Extraction de l’ADN de levure
  • Protocole
  • Cultiver une colonie de levures dans 10 mL de milieu complet en conditions stériles pendant 48 h à 37 °C.
  • Laisser sédimenter le culot de levures.
  • Éliminer le surnageant avec une pipette Pasteur munie d’une tétine en aspirant doucement pour ne pas remettre les cellules en suspension.
  • Mettre le culot en suspension dans 2 mL de solution d'enzyme (lyticase) à 5 000 U.mL-1.
  • Incuber une dizaine de minutes.
  • Ajouter 0,5 mL de la solution de SDS (sodium dodécyle sulfate à 10 %) et 0,5 mL d'une solution de soude à 0,6 mol.L-1.
  • Recouvrir le tube de parafilm et l’agiter jusqu’à obtenir une solution visqueuse.
  • Ajouter 2 mL d'un mélange chloroforme/alcool isoamylique ( 3/1) et agiter pendant 5 minutes.
  • Centrifuger 10 minutes à 3000 tours/minute.
  • Verser lentement 6 mL d'éthanol à 95 % à la surface du liquide et agiter doucement si l'ADN ne précipite pas spontanément.
  • Milieu complet pour levure
Extrait de levure : 10g.L-1
Peptone : 7 g.L-1
Glucose : 20g.L-1
  • Autres solutions
Solution de lyticase à 5 000 U.mL-1
Solution de sodium dodécylsulfate à 10 % dans éthanol 95° à 50 %
Solution de NaOH à 0,6 mol.L-1
Mélange chloroforme/alcool isoamylique ( 3/1)
Éthanol à 95 %

RETOUR AU SOMMAIRE

TOUS DROITS RESERVES
© 1998-2008 D. Pol
dpol#noos.fr
Emplacements des visiteurs de cette page

N'hésitez pas à faire connaître vos impressions, commentaires, suggestions etc