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 Extraction de l'ADN de germes de blé
 

 

  • Protocole
•    Verser 50 g de germes de blé dans 100 mL d’eau distillée.
•    Ajouter  1 g de sel de cuisine et 5 g d’acide citrique et mélanger avec un agitateur.
•    Laisser reposer 10 minutes en agitant de temps en temps (ou utiliser un agitateur magnétique).
•    Laisser décanter (ou centrifuger) et jeter le surnageant.
•    Ajouter 100 mL de tampon d’extraction et 2 mL de la solution de protéase (trypsine à 25 mg.mL-1) et incuber 20 minutes en agitant de temps en temps
•    Filtrer sur gaze et presser le tissu pour extraire le reste du jus.
•    Ajouter 10 g de sel et remuer pendant 10 minutes sans faire de mousse.
•    Centrifuger et récupérer le surnageant.
•    Prélever un échantillon du surnageant dans un tube et ajouter lentement trois fois son volume d'alcool absolu glacé en faisant couler l’alcool le long du tube.
•    Enrouler sur une pipette Pasteur le précipité d'ADN qui se forme à l'interface eau-alcool.
Si l’on veut utiliser l’ADN pour une électrophorèse, centrifuger l’extrait, éliminer le surnageant et sécher le culot pour éliminer l’alcool avant de le dissoudre dans du tampon TE.
Si l’on veut utiliser l’ADN extrait pour caractériser ses constituants chimiques, centrifuger l’extrait, éliminer le surnageant et sécher le culot pour éliminer l’alcool avant de le dissoudre dans l’eau distillée.

  • Tampon d’extraction
sel de cuisine : 3 g
acide citrique : 5 g
détergent liquide : 1 mL
  • Protéase
Trypsine à 25 mg.mL-1)

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