REALISATION ET SUIVI PAR EXAO DE REACTIONS ENZYMATIQUES IN VITRO
Cliquer sur les graphiques pour obtenir des images de plus grandes dimensions.
|
|
REALISATION ET SUIVI PAR EXAO DE REACTIONS ENZYMATIQUES IN VITRO |
|
|
|
||
|
Cliquer sur les graphiques pour obtenir des images de plus grandes dimensions. |
Montage pour les mesures : colorimètre, interface, ordinateur
Oxydation du dihydroxybenzène par l'oxygène en absence
(tracé en noir) et en présence (tracé en bleu) de
l'enzyme tyrosinase.
Réduction du peroxyde d'hydrogène par le méthoxyphénol
(gaïacol) en absence (tracé en noir) et en présence
(tracé en bleu) de l'enzyme peroxydase.
On a enregistré les variations de transmittance (% de transmission de la lumière) obtenues avec le mélange méthoxyphénol-peroxyde d’hydrogène sous l’action de la peroxydase au cours d’une mesure de 3 minutes (figure 1).
Figure 1 : évolution de la transmittance au cours du temps
La transmittance est convertie en absorbance par le calcul à l’aide du logiciel ce qui permet de tracer la courbe de la figure 2. Cette étape est rendue nécessaire par le fait que seule l’absorbance est directement proportionnelle à la concentration en substance colorée dans la cuve de mesure.
Figure 2 : variations de l’absorbance au cours du temps
La discussion sur l’allure de la cinétique conduit au calcul de la vitesse initiale par la mesure de la pente de la partie linéaire initiale du tracé (figure 3).
Figure 3 : tracé de la droite dont la pente correspond à
la vitesse initiale
Tous droits réservés, D. Pol, 1998