Fiche technique
 Régénération d'une plante à partir d'un explant foliaire




Préparation du milieu de culture

Prélever stérilement 10 mL de chacune des deux solutions minérales complètes (macroéléments et oligoéléments) dans une fiole jaugée de 200 mL et compléter à 200 mL avec de l’eau distillée.

Placer 6 g de glucose et 1.3 g d’agar dans un ballon de 300 à 500 mL et verser la solution précédente dans le ballon.

Passer le ballon au four à microondes pour dissoudre l’agar en surveillant pour éviter les projections.

Laisser refroidir jusqu'à 40 à 50°C et verser le milieu dans des petits pots sur une hauteur de 2 à 3 cm en faisant attention de ne pas faire couler de milieu sur les parois.

Ajouter éventuellement dans un flacon de l’auxine (1 mg.L-1), dans un autre de la kinétine (1 mg.L-1), dans un autre un mélange d’auxine (1 mg.L-1) et de kinétine (0.5 mg.L-1).

Préparer des bouchons de coton cardé pour chaque pot et les recouvrir d’un morceau de papier d’aluminium.

Autoclaver les flacons contenant le milieu. Commencer la préparation de la suite des opérations pendant l’autoclavage. Dès qu’il est terminé, sortir les flacons et les laisser refroidir.

Préparation de la zone de travail

Nettoyer à l’eau de Javel le plan de travail autour d’un bec bunsen.

Préparer un flacon d’alcool avec un couvercle, des pinces, un scalpel, une boîte de Pétri stérile en verre, un flacon d’eau de Javel diluée et 3 flacons d’eau stérile.

Préparation des explants

Enlever hors du plan de travail les deux premières couronnes de feuilles d’une endive.

Toutes les opérations suivantes doivent être menées en conditions stériles.

Dans la zone de travail stérile, enlever trois autres couronnes de feuilles avec les pinces stérilisées (tremper l’extrémité dans l’alcool, la passer à la flamme et laisser refroidir) et les jeter.

Prélever une feuille, la tremper dans l’eau de Javel pendant 5 minutes et la rincer dans 3 bains successifs d’eau stérile.

Placer la feuille dans la boîte de Pétri stérile. En tenant la feuille au fond de la boîte avec les pinces stérilisées, découper un fragment rectangulaire de 2 cm x 0.5 cm verticalement dans la partie médiane de la feuille. Couper l’extrémité apicale en biseau.

Mise en culture

Récupérer les flacons de milieu refroidis et les apporter dans la zone de travail.

Enfoncer un explant par sa face plane au centre du milieu de culture (l’enfoncer à mi hauteur).

Remettre le bouchon de coton et le papier d’aluminium. Etiqueter le flacon.

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Didier Pol © 2006 
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