Travaux pratiques

ACTIVITE PHOTOCHIMIQUE DE CHLOROPLASTES ISOLES

Nous savons que les chloroplastes sont les organites dans lesquels se déroule la photosynthèse chez les végétaux chlorophylliens. Leurs pigments captent certaines longueurs d'onde de la lumière visible dont ils transférent l'énergie à des réactions endoénergétiques de biosynthèse. Des expériences historiques de photosynthèse in vitro menées sur des chloroplastes isolés ont permis d'identifier certaines de ces réactions et de découvrir ainsi les principes physicochimiques de la photosynthèse.

Problème : dans quel(s) type(s) de réactions chimiques intervient l'énergie lumineuse captée par les pigments photosynthétiques ?

On se propose de mesurer l'activité photosynthétique de chloroplastes isolés en suspension dans un tampon approprié en suivant par oxymétrie leur production d'oxygène moléculaire lorsqu'ils sont exposés à la lumière.

Protocole

  1. Étalonner l'électrode à oxygène.
  2. Placer 5 mL de suspension de chloroplastes dans la cuve de mesure et la mettre à l'abri de la lumière avec un cache.
  3. Paramétrer l'acquisition pour 450 secondes.
  4. Démarrer l'acquisition à l'obscurité et enregistrer 90 s.
  5. Éclairer la suspension pendant 90 s.
  6. Injecter 0.1 mL de la solution oxydante et poursuivre l'enregistrement pendant 1 min.
  7. Sauver les résultats.
Rincer soigneusement l'électrode et la cuve de mesure avant de mener une seconde acquisition avec un nouvel échantillon de chloroplastes.
  1. Placer 5 mL de suspension de chloroplastes dans la cuve de mesure et la mettre à l'abri de la lumière avec un cache.
  2. Démarrer l'acquisition à l'obscurité et enregistrer pendant 90 s à l'obscurité.
  3. Injecter l'oxydant et enregistrer pendant 90 s à l'obscurité.
  4. Éclairer et poursuivre l'enregistrement pendant le reste du temps d'acquisition.
  5. Sauver les résultats.
  1. Imprimer les graphiques et y porter les annotations nécessaires.
  2. Décrire la méthode utilisée, la ou les hypothèses que l'on cherche à tester dans ces expériences et les résultats obtenus.
  3. Les résultats obtenus permettent-ils de valider les hypothèses testées ?
Voir un exemple de résultats

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