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pratiques
ACTIVITE PHOTOCHIMIQUE DE CHLOROPLASTES
ISOLES
Nous savons que les chloroplastes sont les organites dans lesquels se
déroule la photosynthèse chez les végétaux
chlorophylliens. Leurs pigments captent certaines longueurs d'onde de la
lumière visible dont ils transférent l'énergie à
des réactions endoénergétiques de biosynthèse.
Des expériences historiques de photosynthèse in vitro
menées sur des chloroplastes isolés ont permis d'identifier
certaines de ces réactions et de découvrir ainsi les principes
physicochimiques de la photosynthèse.
Problème : dans quel(s)
type(s) de réactions chimiques intervient l'énergie lumineuse
captée par les pigments photosynthétiques ?
On se propose de mesurer l'activité photosynthétique de
chloroplastes isolés en suspension dans un tampon approprié
en suivant par oxymétrie leur production d'oxygène moléculaire
lorsqu'ils sont exposés à la lumière.
Protocole
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Étalonner l'électrode à oxygène.
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Placer 5 mL de suspension de chloroplastes dans la cuve de mesure et la
mettre à l'abri de la lumière avec un cache.
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Paramétrer l'acquisition pour 450 secondes.
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Démarrer l'acquisition à l'obscurité et enregistrer
90 s.
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Éclairer la suspension pendant 90 s.
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Injecter 0.1 mL de la solution oxydante et poursuivre l'enregistrement
pendant 1 min.
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Sauver les résultats.
Rincer soigneusement l'électrode et la cuve de mesure avant de mener
une seconde acquisition avec un nouvel échantillon de chloroplastes.
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Placer 5 mL de suspension de chloroplastes dans la cuve de mesure et la
mettre à l'abri de la lumière avec un cache.
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Démarrer l'acquisition à l'obscurité et enregistrer
pendant 90 s à l'obscurité.
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Injecter l'oxydant et enregistrer pendant 90 s à l'obscurité.
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Éclairer et poursuivre l'enregistrement pendant le reste du temps
d'acquisition.
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Sauver les résultats.
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Imprimer les graphiques et y porter les annotations nécessaires.
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Décrire la méthode utilisée, la ou les hypothèses
que l'on cherche à tester dans ces expériences et les résultats
obtenus.
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Les résultats obtenus permettent-ils de valider les hypothèses
testées ?
Voir un exemple de résultats
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