Fiche technique

Extraction et séparation des pigments des organismes chlorophylliens




Extraction (pigments apolaires)

  1. Broyer l'échantillon avec un peu de sable et une pincée de chlorure de calcium dans un mortier jusqu'à obtenir un mélange homogène.
  2. Ajouter 5 mL d'acétone et broyer de nouveau soigneusement.
  3. Laisser décanter et récupérer le liquide dans un tube en verre.
  4. Ajouter 5 mL d'acétone et broyer de nouveau.
  5. Verser le liquide dans un tube de centrifugeuse et ajouter la solution obtenue au 3.
  6. Centrifuger et récupérer le surnageant.
  7.  Réunir tous les extraits dans le même flacon, l'étiqueter avec le nom de l'espèce et du solvant utilisés et le mettre à l'abri de la lumière.
Extraction (pigments polaires)
  1. Broyer l'échantillon avec un peu de sable et une pincée de chlorure de calcium dans un mortier jusqu'à obtenir un mélange homogène.
  2. Ajouter 5 mL d'eau distillée et broyer de nouveau soigneusement.
  3. Laisser décanter et récupérer le liquide dans un tube.
  4. Ajouter 5 mL d'eau distillée et broyer de nouveau.
  5. Verser le liquide dans un tube de centrifugeuse et ajouter la solution obtenue au 3.
  6. Centrifuger et récupérer le surnageant.
  7. Réunir tous les extraits dans le même flacon, l'étiqueter avec le nom de l'espèce et du solvant utilisés et le mettre à l'abri de la lumière.
Séparation des pigments par chromatographie sur papier
  1. Tirer un trait transversal avec un crayon à 1 cm du bord de la bande.
  2. Ecraser une rondelle de feuille au centre du trait avec l'extrémité d'un agitateur de verre et enlever les débris solides à la pince.
  3. Laisser sécher le dépôt en s'aidant éventuellement d'un sèche-cheveux.
  4. Recommencer les opérations 2 et 3 jusqu'à obtenir un dépôt intensément coloré.
  5. Placer la bande dans le flacon, le fermer hermétiquement et faire coulisser le crochet de façon à ce que le bord de la bande plonge dans le solvant à 1 cm au dessous du dépôt..
  6. Laisser le chromatogramme se développer pendant 40 à 45 minutes.
  7. Voir des résultats

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