FICHE TECHNIQUE

DÉTECTION DE PROTÉINES ENZYMATIQUES
EXPORTÉES ET NON EXPORTÉES

Protocole

1. Préparer 6 tubes et les marquer T1 et T2 (témoins), Se et Si (tests pour la saccharase extra et intracellulaire), Me et Mi (tests pour la maltase extra et intracellulaire).
2. Centrifuger un tube de culture et prélever le surnageant.
3. Verser 3 mL de surnageant dans les tubes T1, Se et Me.
4. Ajouter 2 mL d'eau dans le tube T1, 2 mL de solution de saccharose dans le tube Se, 2 mL de solution de maltose dans le tube Me et mettre à incuber au bain marie à 35°C.
5. Tester le contenu des tubes pour la présence de glucose au bout de 10 minutes et compléter les cases correspondantes du tableau.
6. Broyer soigneusement le culot en présence d'une pincée de sable, d'abord à sec puis en présence de 10 mL de tampon.
7. Centrifuger l'extrait, prélever le surnageant et en verser 3 mL dans les tubes marqués T2, Si et Mi.
8. Ajouter 2 mL d'eau dans le tube T2, 2 mL de solution de saccharose dans le tube Si et 2 mL de solution de maltose dans le tube Mi et mettre à incuber au bain marie à 35°C.
9. Tester le contenu des tubes pour la présence de glucose au bout de 15 minutes et noter les résultats dans le tableau.

Test de détection du glucose "Clinistix"
- Prélever un échantillon de la solution à tester avec une pipette Pasteur.
- Déposer une goutte sur la zone réactive de la bandelette.
- Attendre 10 secondes avant de lire le résultat (comparer la couleur obtenue avec celles de l'échelle de référence).

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Didier Pol © 2006 
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