FICHE TECHNIQUE
Chromatographie sur couche mince des acides aminé des protéines



  • Protocole
  1. Placer le solvant dans la cuve sur une hauteur de 2 cm et fermer hermétiquement (couvercle ou film étirable).
  2. Tirer un trait de crayon sur la cellulose de la plaque à 3 cm du bord et parallèlement à lui sans arracher le matériau et sans le toucher avec les doigts.
  3. Prendre le capillaire disposé dans le tube contenant l’échantillon à analyser, essuyer son extrémité avec un essuie-tout puis déposer une microgoutte sur le trait à 1 cm du bord latéral gauche de la plaque. Faire le dépôt rapidement et sans appuyer de façon à ce que la tache formée n’excède pas 2 mm de diamètre. Prendre soin de ne pas arracher la cellulose avec le capillaire.
  4. Procéder de la même manière pour chacune des 10 solutions d’acides aminés disposées dans les tubes en espaçant les gouttes d’environ 1 cm. Utiliser uniquement le capillaire placé dans le tube correspondant et sécher les taches si nécessaire.
  5. Faire un deuxième dépôt de l’hydrolysat à 1 cm du bord latéral droit de la plaque.
  6. Placer la plaque dans la cuve à chromatographie contenant le solvant de développement. Le solvant ne doit pas atteindre le trait de crayon et le flacon ne doit plus être manipulé. Fermer hermétiquement le flacon.
  7. Laisser le développement se poursuivre pendant 45 minutes.
  8. Sortir la plaque avec des pinces et la sécher avec un sèche-cheveux (air froid).

  9. Révélation. Mettre des gants et un masque pour la révélation et manipuler les plaques à la pince. Pas de flamme (acétone). La ninhydrine est cancérogène : prendre les précautions d'usage.
    Sous hotte, tremper la plaque rapidement dans le révélateur puis laisser évaporer l'essentiel du solvant sous la hotte.
    Finir au sèche cheveux chauffant (ou placer à l'étuve à 80°C et surveiller pour ne pas "cuire" les plaques) jusqu'à apparition des tâches.
Acides aminés Symboles à 3 lettres Symboles à une lettre Acides aminés Symboles à 3 lettres Symboles à une lettre
Alanine ala A Leucine leu L
Arginine arg R Lysine lys K
Asparagine asn N Méthionine met M
Acide aspartique asp D Phénylalanine phe F
Cystéine cys C Proline pro P
Glutamine gln Q Sérine ser S
Acide glutamique glu E Thréonine thr T
Glycine gly G Tryptophane trp W
Histidine his H Tyrosine tyr Y
Isoleucine ile I Valine val V


  • Résultats

Chromatographie de dix-neufs acides aminés protéinogènes
H A K M C I V F D S G P R E N Y Q W T

Solvant : butanol, acide acétique, eau (70, 18, 12 ; v %)
Révélateur : ninhydrine
  • Réactifs
    • Solvant :
butanol, acide acétique, eau (70, 18, 12 ; v %)
    • Révélateur :
ninhydrine à 1% dans l'acétone.
NB Le protocole indiqué ici s'applique à des plaques de cellulose sur support souple (papier d'aluminium).
Le dépôt est de meilleure qualité s'il est fait avec une micropipette calibrée (2 µL) plutôt qu'avec un capillaire. Changer de cône pour chaque acide aminé.

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